ساخت لنتی‏ویروس‏های نوترکیب ناقل ژن dj-۱ و انتقال آن‏ها به سلول‏های انسانی

Authors
abstract

هدف: اهداف این مطالعه ساب‏کلونینگ ژن (park7) dj-1 به‏ درون وکتور انتقال لنتی‏ویروسی، تولید لنتی‏ویروس‏های نوترکیب و آلوده سازی سلول‏های هدف با این ویروس‏ها می‏باشند. مواد وروش‏ها: ژن dj1 با استفاده از آنزیم های محدود کننده ecor1 و xho1 از وکتور pcdna-dj1 به دست آمد. وکتور انتقالی لنتی ویروس به صورت همزمان توسط آنزیم های محدود کننده ecor1 و sal1 بریده شد. ژن dj1 توسط آنزیم dna لیگاز t4 به داخل وکتور ترانسفر و بالادست ژن dj1 وارد شد، به طوریکه توالی dj1-ires-jred در پایین دست و تحت کنترل پروموتر cmv قرار گرفت. برای تولید لنتی ویروس های نوترکیب، وکتور ساخته شده به همراه دو وکتور بسته بندی و پوشش ویروس به طور همزمان به درون سلول های hek (human embryonic kidney) انتقال داده شدند. ویروس های ساخته شده برای آلوده سازی سلول های هدف استفاده شدند. نتایج: برای اطمینان از درستی ساب‏کلونینگ از تست‏های آنزیمی و pcr استفاده شد. همچنین برای مشاهده بیان ژن jred که نشان دهنده موفقیت ما در انتقال ژن می باشد، از میکروسکوپ فلورسانس استفاده شد. سپس برای مشاهده افزایش بیان ژن dj1 در سلول های آلوده شده نسبت به سلول های طبیعی، از تست rt-pcr استفاده شد. نتیجه گیری: این مطالعه کاربرد موفقیت آمیز ناقل‏های لنتی‏ویروسی در انتقال ژن به سلول‏های یوکاریوتی را نشان می‏دهد و روشن می‏سازد که این ناقل‏ها می‏توانند در درمان بیماری‏های سیستم عصبی مورد استفاده قرار گیرند.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

ساخت لنتی‏ویروس‏های نوترکیب ناقل ژن DJ-1 و انتقال آن‏ها به سلول‏های انسانی

هدف: اهداف این مطالعه ساب‏کلونینگ ژن (PARK7) DJ-1 به‏ درون وکتور انتقال لنتی‏ویروسی، تولید لنتی‏ویروس‏های نوترکیب و آلوده سازی سلول‏های هدف با این ویروس‏ها می‏باشند. مواد وروش‏ها: ژن DJ1 با استفاده از آنزیم های محدود کننده EcoR1 و Xho1 از وکتور pcDNA-DJ1 به دست آمد. وکتور انتقالی لنتی ویروس به صورت همزمان توسط آنزیم های محدود کننده EcoR1 و Sal1 بریده شد. ژن DJ1 توسط آنزیم DNA لیگاز T4 به داخل ...

full text

ساخت لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن gdnf و بیان آن در سلولهای انسانی

بیماری پارکینسون دومین بیماری شایع در بین بیماری های زوال نورونی در اکثرکشورهای جهان است که حدود 1% جمعیت بالای 65 سال را گرفتار می کند. دلیل اصلی به وجود آمدن این بیماری تخریب پیش رونده نورون های دوپامین ساز در ناحیه substantia nigra pars compacta (snpc) در مغز میانی می باشد زیرا این سلول ها دوپامین می سازند و دوپامین یک نوروترانسمیتر شیمیایی است که سیگنال ها را به ناحیه striatumو سپس به نواحی...

15 صفحه اول

تولید لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن فاکتور نوروتروفیک gdnf با تیتر بالا و انتقال آنها به آستروسیتهای انسانی

لنتی ویروسها از جمله موثرترین ویروسهای نوترکیب برای انتقال ژن به سلولها و بافتهای پستانداران بشمار میرود. این مطالعه شامل دو بخش اساسی است: (1) بررسی کارائی ستونهای پروتئینی در تولید لنتی ویروسهای نوترکیب با تیتر بالا و (2) بکارگیری این ستونها درتولید لنتی ویروسهای نوترکیب حامل ژن فاکتورنوروتروفیک gdnf. در بخش اول مطالعه با استفاده از دو ناقل انتقال (حامل gfp یا jred) تولید لنتی ویروس نوترکیب ک...

full text

ساخت یک سازه بهینه شده لنتی ویروسی نوترکیب حاوی ژن pdx-۱ برای انتقال ژن به سلول های بنیادی در راستای ژن درمانی دیابت نوع ۱

چکیده زمینه و هدف: امروزه بسیاری از پروتکل های ژن درمانی با حامل های لنتی ویروسی انجام می شود. یکی از مهم ترین فاکتورهایی که در تکوین پانکراس و رونویسی ژن انسولین نقش دارد فاکتور رونویسی pancreatic & duodenal homeobox 1 (pdx-1) است. هدف از این مطالعه بهینه سازی سازه لنتی ویروسی حاوی ژن pdx-1 برای ترانسفکشن سلول های بنیادی در راستای ژن درمانی دیابت نوع 1 بود. روش بررسی: در این مطالعه تجربی ابتدا...

full text

انتقال ژن به سلولهای کبدی رده lmh جوجه بوسیله لنتی ویروسهای نوترکیب

لنتی ویروسها از جمله موثرترین ویروسهای نوترکیب برای انتقال ژن به سلولها و بافتهای پستانداران بشمار میرود. در این مطالعه، عملکرد لنتی ویروسهای انسانی را در انتقال ژن خارجی به سلولهای طیور بررسی کردیم. سه ناقل لنتی ویروسی بنامهای ناقل انتقال (ناقل ترانسفر حامل ژن گزارشگر gfp)، ناقل بسته بندی و ناقل غشائی را همزمان به سلولهای مولد ویروس (رده hek-293t) منتقل کردیم. سوپرناتان سلولهای ترانسفکت شده را...

full text

کلونینگ ژن هورمون رشد (GH) فیل ماهی (Huso huso) در سازه های لنتی ویروسی و غیر ویروسی و بررسی بیان ژن در سلولهای بنیادی جنینی انسانی

یکی از مهمترین کاربردهای مهندسی ژنتیک در تحقیقات آبزی پروری، افزایش میزان رشد ماهیان پرورشی از طریق انتقال ترنس ژنهای هورمون رشد به آنهاست. اما پیش از هر گونه تلاش در جهت انتقال ژن، ساخت و سنتز این ترنس ژنهای مطلوب الزامی است. از این رو در این تحقیق، ابتدا لنتی ویروس های نوترکیب حاوی ژن هورمون رشد (GH)فیل ماهی Huso huso به عنوان یکی از مهمترین گونه های ماهیان خاویاری تولید شد، سپس از آنها برای ...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
سلول و بافت

جلد ۴، شماره زمستان۹۲، صفحات ۳۸۱-۳۸۸

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023